কিভাবে 3 টি সহজ ধাপে টিবিই বাফার তৈরি করবেন

টিবিই বাফারটি ট্রিস বেস, বরিক এসিড এবং ইডিটিএ (অথবা ট্রিস-বোরেট-ইডিটিএ একত্রিত) দ্বারা গঠিত একটি বাফার সমাধান। এই বাফারটি প্রায়ই পিআরআর এম্প্লিফিকেশন, ডিএনএ পরিশোধন প্রোটোকল বা ডিএনএ ক্লোনিং পরীক্ষার ফলে ডিএনএ পণ্যগুলির বিশ্লেষণে অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিসের জন্য ব্যবহৃত হয়।

টিবিই বাফারটি বিশেষভাবে ছোট ডিএনএ টুকরা (MW <1000) বিচ্ছেদ করার জন্য বিশেষভাবে কার্যকর, যেমন সীমাবদ্ধতা এনজাইম ডিজিস্টগুলির ছোট পণ্য। টিবিই একটি বৃহত্তর বাফারিং ক্ষমতা আছে এবং TAE বাফার চেয়ে তীক্ষ্ণ রেজল্যুশন দিতে হবে। টিএইই বাফার ট্রিস বেস, এসিটিক এসিড এবং ইডিটিএ (ট্রিস-অ্যাসেটেট-ইডিটিএ) গঠিত একটি সমাধান।

টিবিই সাধারণত টিএই এর তুলনায় বেশি ব্যয়বহুল এবং ডিএনএ লিগ্যাসকে বাধা দেয়, যা পরবর্তী ডিএনএ পরিশোধন এবং বন্ধন পদক্ষেপের উদ্দেশ্যে সমস্যার সৃষ্টি করে। অনুসরণ করা তিনটি সহজ পদক্ষেপের সাথে, কিভাবে টিবিই বাফার তৈরি করবেন তা শিখুন। এই বাফারটি তৈরি করতে প্রায় 30 মিনিট সময় লাগবে না। এখানে কিভাবে:

ইডিটিএ স্টক সমাধান

একটি EDTA (ethylenediamine tetraacetic অ্যাসিড) সমাধান আগে প্রস্তুত করা উচিত। পিএইচ 8.0 এর সাথে সামঞ্জস্য না হওয়া পর্যন্ত EDTA সমাধান সম্পূর্ণরূপে যেতে হবে না। 500 এমিলিটার স্টক সমাধান 0.5 এম ইডিটিএর জন্য, ইডিটিএ ডিসডিয়াম লবণ (FW = 372.2) এর 93.05 গ্রাম। তারপর 400 মিলিলিটার ডিওনিযুক্ত পানিতে দ্রবীভূত করুন এবং NaOH দিয়ে পিএইচ সমন্বয় করুন। তারপরে, 500 মিলিলিটারের চূড়ান্ত ভলিউমের সমাধানটি উপরে তুলুন।

টিবিই এর স্টক সমাধান

54 জি ট্রিস বেস (FW = 121.14) এবং 27.5 গ্রাম বরিরিক অ্যাসিড (FW = 61.83) ওজন করে প্রায় 900 মিলিলিটারের ডিওনযুক্ত পানিতে টিবিই দ্বারা টিবিইয়ের একটি ঘনীভূত (5x) স্টক সমাধান করুন। তারপর 0.5 এম ইডিটিএ (পিএইচ 8.0) ২0 মি মিলিলিটার যোগ করুন এবং 1 লিটারের চূড়ান্ত ভলিউমের সমাধানটি সামঞ্জস্য করুন। এই সমাধান কক্ষ তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা যেতে পারে কিন্তু একটি উদ্দীপক পুরোনো সমাধান গঠন করা হবে। গ্লাস বোতলগুলিতে বাফারটি সংরক্ষণ করুন এবং যদি একটি বিক্ষোভ তৈরি হয় তবে তা বাতিল করুন।

টিবিই এর সমাধান সমাধান

অ্যাগ্রোজেল জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিসের জন্য, একটি টিবিই বাফার 0.5x এর ঘনত্ব (সংহত স্টকের 1:10 dilution) ব্যবহার করা যেতে পারে। ডিওনযুক্ত পানিতে 10x দ্বারা স্টক সমাধান dilute। চূড়ান্ত দ্রাবক ঘনত্ব 45 মিমি ট্রিস-বোরেট এবং 1 মিমি ইডিটিএ। বাফার এখন একটি agarose জেল চলমান ব্যবহারের জন্য প্রস্তুত।

তুমি কি চাও

টিবিই বাফার তৈরি করতে, আপনার কেবলমাত্র চারটি পদার্থ দরকার। এই তালিকায় অবশিষ্ট আইটেম সরঞ্জাম। প্রয়োজনীয় চারটি পদ ইডিটিএ ডিসডোমিয়াম লবণ, ট্রিস বেস, বরিরিক এসিড এবং ডিওনিযুক্ত পানি।

সরঞ্জাম হিসাবে, আপনি একটি পিএইচ মিটার এবং ক্রমাঙ্কন মান, উপযুক্ত হিসাবে প্রয়োজন হবে। এর পাশাপাশি, আপনার 600-মিলিলিটার এবং 1500 মিলিলিটার বিয়ারকার বা ফ্লাস্কগুলি দরকার হবে। আপনার সরঞ্জাম প্রয়োজন রাউন্ডিং স্নাতকের স্নাতকের এবং বার এবং আলোড়ন প্লেট স্নাতকের হয়।

আপনি শুরু করার আগে আপনার প্রয়োজনীয় সবকিছু আছে তা নিশ্চিত করার জন্য আপনি যে ল্যাবটি ব্যবহার করছেন সেটির তালিকাটি পরীক্ষা করে দেখুন। সমাধান প্রস্তুত করার মাঝখানে থামার চেয়ে কিছুই খারাপ নয় কারণ আপনি সঠিক উপকরণগুলি চালাচ্ছেন। আপনার ল্যাব স্কুলের বা আপনার কাজের সাইটে থাকলে, সঠিক কর্মচারীদের সাথে চেক করুন যে তাদের স্টকগুলিতে সমস্ত আইটেম রয়েছে। এভাবে আপনি শেষ সময় এবং শক্তি সংরক্ষণ করতে পারে।