Sequencing ডিএনএ জন্য কৌশল

জৈব প্রযুক্তির ক্ষেত্র ধ্রুবক পরিবর্তন এক। বিজ্ঞানীদের উদ্ভাবন এবং সৃজনশীলতা এবং মৌলিক আণবিক কৌশলতে সম্ভাব্যতা দেখতে তাদের নতুনত্ব এবং এটি নতুন প্রক্রিয়াগুলিতে প্রয়োগ করার উপর অত্যাধুনিক গবেষণার দ্রুত বৃদ্ধি এবং বিকাশের উপর নির্ভরশীল। পিসিআর আবির্ভাব জেনেটিক রিসার্চে অনেকগুলি দরজা খুলে দিয়েছে, ডিএনএ বিশ্লেষণের একটি উপায় এবং তাদের ডিএনএ ক্রমগুলির উপর ভিত্তি করে বিভিন্ন জিন সনাক্তকরণ। ডিএনএ সিকোয়েন্সিং এছাড়াও জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করার আমাদের ক্ষমতা নির্ভর করে যা ডিএনএর স্তরগুলিকে আলাদা করতে পারে যা একটি বেস জুড়ি হিসাবে আকারে ভিন্ন।

ডিএনএ Sequencing

1970 এর দশকের শেষ দিকে দীর্ঘ ডিএনএ অণুর জন্য দুটি ডিএনএ সিকোয়েন্সিং কৌশল উদ্ভাবিত হয়েছিল: সাঞ্জার (বা ডাইডক্সি) পদ্ধতি এবং ম্যাক্সাম-গিলবার্ট (রাসায়নিক ক্ল্যাভেজ) পদ্ধতি। ম্যাক্সাম-গিলবার্ট পদ্ধতিটি রাসায়নিক দ্বারা নিউক্লিওটাইড-নির্দিষ্ট ক্ল্যাভেজের উপর ভিত্তি করে এবং অলিগোনউইকিটাইডস (ছোট নিউক্লিওটাইড পলিমার, সাধারণত দৈর্ঘ্যের 50 বেস-জোড়া থেকে ছোট) অনুক্রমের জন্য সর্বোত্তম ব্যবহার করা হয়। স্যাঞ্জার পদ্ধতিটি সাধারণত ব্যবহার করা হয় কারণ এটি প্রযুক্তিগতভাবে সহজে প্রয়োগ করা প্রমাণিত হয়েছে, এবং পিসিআর এবং প্রযুক্তির অটোমেশন এর আবির্ভাবের সাথে, কিছু সম্পূর্ণ জিন সহ ডিএনএর দীর্ঘতর প্রান্তে সহজেই প্রয়োগ করা হয়।

এই কৌশলটি পিসিআর বর্ধিত প্রতিক্রিয়াগুলির সময় ডাইডক্সিনক্লিউওলোটাইড দ্বারা শৃঙ্খলা অবসানের উপর ভিত্তি করে তৈরি।

স্যাঞ্জার পদ্ধতি

স্যাঞ্জার পদ্ধতিতে, ডিএনএ স্ট্র্যান্ড বিশ্লেষণ করা হয় একটি টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহৃত হয় এবং ডিএনএ পলিমারেজ ব্যবহার করা হয়, একটি পিসিআর প্রতিক্রিয়াতে, প্রিমার ব্যবহার করে পরিপূরক স্ট্রেন তৈরি করা হয়। চারটি নিউক্লিওটাইডস (এটিপি, সিটিপি, জিটিপি বা টিটিপি) একের মধ্যে চারটি ভিন্ন পিসিআর প্রতিক্রিয়া মিশ্রন তৈরি করা হয়, প্রতিটিটিতে ডাইডক্সিনকুইক্লিওসাইড ট্রাইফসফেট (ডিডিএনটিপি) এনালগগুলির একটি নির্দিষ্ট শতাংশ থাকে।

নতুন ডিএনএ স্ট্র্যান্ডের সংশ্লেষ অব্যাহত থাকে যতক্ষণ না এই এনালগগুলি একত্রিত হয়, সেই সময়ে স্ট্র্যান্ডটি অকালিকভাবে ছিন্ন হয়। প্রতিটি পিসিআর প্রতিক্রিয়া শেষ হয়ে যাবে ডিএনএ স্রোতের বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের মিশ্রণ, যা নিউক্লিওটাইডের সাথে শেষ হবে যা ডায়াবেক্সির প্রতিক্রিয়াটির জন্য লেবেলযুক্ত ছিল। জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস তারপর চারটি পৃথক লেনের চারটি প্রতিক্রিয়াগুলির স্তরগুলিকে আলাদা করার জন্য এবং নিউক্লিওটাইডের দৈর্ঘ্যের দৈর্ঘ্যের উপর ভিত্তি করে মূল টেম্পলেটের ক্রম নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়।

স্বয়ংক্রিয় সঞ্জর প্রতিক্রিয়াতে, প্রাইমারগুলি চারটি ভিন্ন রঙিন ফ্লুরোসেন্ট ট্যাগগুলির সাথে লেবেলযুক্ত হয়। পিসিআর প্রতিক্রিয়া, বিভিন্ন dideoxynucleotides উপস্থিতিতে, উপরে বর্ণিত হিসাবে সঞ্চালিত হয়। যাইহোক, পরবর্তী, চার প্রতিক্রিয়া মিশ্রণ তারপর একত্রিত করা হয় এবং একটি জেল একটি একক লেন প্রয়োগ। লেজার বিম ব্যবহার করে প্রতিটি ফ্যাগমেন্টের রঙ সনাক্ত করা হয় এবং তথ্য এমন একটি কম্পিউটার দ্বারা সংগৃহীত হয় যা ক্রোমটোগ্রামগুলি তৈরি করে যা প্রতিটি রঙের শিখর দেখায়, যার থেকে টেমপ্লেট ডিএনএ ক্রম নির্ধারণ করা যায়।

সাধারণত, স্বয়ংক্রিয় সিকোয়েন্সিং পদ্ধতি দৈর্ঘ্যের মধ্যে প্রায় 700-800 বেস-জোড়া সর্বাধিক সিকোয়েন্সগুলির জন্য নির্ভুল। যাইহোক, প্রাইমার ওয়াকিং এবং শটগান সিঙ্কেনসিংয়ের মতো ধাপ-ভিত্তিক পদ্ধতিগুলি ব্যবহার করে, বড় জিনগুলির পূর্ণ ক্রম এবং প্রকৃতপক্ষে সমগ্র জিনোমগুলি সম্পূর্ণ করা সম্ভব।

প্রাইমার ওয়াকিংয়ে, সঞ্জর পদ্ধতি ব্যবহার করে একটি বৃহত্তর জিনের কার্যক্ষম অংশটি ক্রম অনুসারে সাজানো হয়। নিউ প্রাইমারগুলি ক্রম অনুসারে একটি নির্ভরযোগ্য সেগমেন্ট থেকে উত্পন্ন হয় এবং মূল প্রতিক্রিয়াগুলির সীমার বাইরে জিনের অংশ ক্রমানুসারে চালিয়ে যেতে ব্যবহার করে।

শটগান সিকোয়েন্সিংটি আরও সুনির্দিষ্ট (পরিচালনাযোগ্য) আকারের টুকরাগুলিতে স্বতঃস্ফূর্তভাবে ডিএনএ সেগমেন্ট কেটে, প্রতিটি ফাটলকে ক্রমান্বয়ে সাজানো এবং ওভারল্যাপিং ক্রমগুলির উপর ভিত্তি করে টুকরাগুলির ব্যবস্থা করে।এই প্রযুক্তিটি ওভারল্যাপিং টুকরাগুলির ব্যবস্থা করার জন্য কম্পিউটার সফটওয়্যার প্রয়োগের মাধ্যমে সহজতর করা হয়েছে।